RasGRP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (bovine): sc-437322

Panoramica

RasGRP1 (proteina 1 che rilascia guanilati di RAS) è un fattore di scambio dei nucleotidi della guanina (GEF) per Ras, sensibile al diacilglicerolo e al Ca²⁺, che collega la segnalazione della fosfolipasi C indotta dai recettori all’attivazione delle GTPasi della famiglia Ras. Promuovendo lo scambio da GDP a GTP su Ras, RasGRP1 contribuisce a propagare la segnalazione MAPK/ERK e interagisce con la dinamica della via PI3K, modulando programmi di attivazione, proliferazione e differenziamento cellulare. Nelle linee immunitarie, RasGRP1 è un mediatore chiave della segnalazione del recettore dell’antigene e contribuisce a determinare le soglie delle risposte trascrizionali a valle. Una segnalazione di RasGRP1 disregolata è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi immunitaria e a contesti di segnalazione oncogenica in cui il controllo della via di Ras è compromesso, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla trasduzione del segnale e sulla regolazione del destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RasGRP1 (bovine) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene in linee cellulari bovine. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RasGRP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di per lo studio della segnalazione di RasGRP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni critici per la funzione di RasGRP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RasGRP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (bovine) e dal RasGRP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (bovine2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus . Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RasGRP1 Plasmide HDR (bovine) e il plasmide HDR RasGRP1 (bovine2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.