Raptor Plasmide Double Nickase (h): sc-400960-NIC

RPTOR codifica Raptor, una subunità impalcatura centrale del complesso mTOR 1 (mTORC1) che recluta i substrati e coordina i segnali di nutrienti, fattori di crescita ed energia per regolare la sintesi proteica, l’autofagia, la biogenesi dei ribosomi e il metabolismo lipidico. Attraverso la fosforilazione di effettori a valle come S6K e 4E-BP1, l’attività di mTORC1 dipendente da Raptor modella i programmi di crescita e proliferazione cellulare e integra la segnalazione lisosomiale con il controllo anabolico. Una disregolazione della segnalazione mTORC1/Raptor è stata implicata in tumori, disturbi metabolici e fenotipi del neurosviluppo, in cui l’alterato controllo della traduzione e dell’autofagia contribuisce a stati cellulari associati alla malattia. In quanto nodo centrale dell’asse PI3K–AKT–mTOR e delle vie di rilevamento degli amminoacidi, Raptor è ampiamente studiato nelle risposte allo stress, nell’omeostasi mitocondriale e lisosomiale e nel cross-talk tra vie di segnalazione.

Raptor Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus RPTOR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di RPTOR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di RPTOR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con RPTOR interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.