Rak Plasmide Double Nickase (h): sc-405590-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Rak Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Rak Double Nickase Plasmid (h) e il Rak Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira FRK. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Rak Antibody (H-12): sc-166478
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Rak Plasmide Double Nickase (h) | sc-405590-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rak Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405590-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene umano **FRK** codifica la tirosin-chinasi non recettoriale **Rak**, un enzima correlato alla famiglia Src, arricchito in contesti epiteliali, che modula la segnalazione proveniente dai recettori per i fattori di crescita e dai complessi di adesione cellula-cellula. Rak partecipa al controllo, dipendente dalla fosforilazione, della dinamica del citoscheletro, della progressione del ciclo cellulare e dei programmi di differenziazione attraverso vie che intersecano la segnalazione **EGFR/ErbB**, la segnalazione delle adesioni focali e la regolazione delle giunzioni. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di FRK sono state associate a proliferazione deregolata e a un’omeostasi epiteliale compromessa, rendendolo rilevante per studi di biologia tumorale, invasione e segnalazione specifica di linea cellulare. In quanto chinasi con effetti dipendenti dal contesto su crescita e motilità, Rak è spesso studiata per mappare reti di fosforilazione e meccanismi di controllo a feedback nella segnalazione indotta da stress e da recettori.
Rak Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FRK nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FRK. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FRK. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FRK interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.