Rak Double Nickase Plasmid (h): sc-405590-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Rak Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Rak Double-Nickase-Plasmid (h) und Rak Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf FRK abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Rak: sc-166478
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Rak Double Nickase Plasmid (h) | sc-405590-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Rak Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405590-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das menschliche FRK-Gen kodiert die nichtrezeptorische Tyrosinkinase Rak, ein mit der Src-Familie verwandtes Enzym, das in epithelialen Kontexten angereichert ist und die Signalübertragung von Wachstumsfaktorrezeptoren sowie Zell-Zell-Adhäsionskomplexen moduliert. Rak ist an der phosphorylierungsabhängigen Kontrolle der Zytoskelettdynamik, der Zellzyklusprogression und von Differenzierungsprogrammen beteiligt – über Signalwege, die sich mit EGFR/ErbB-Signalen, Fokaladhäsions-Signalen und der Regulation von Zellkontakten überschneiden. Eine veränderte FRK-Aktivität oder -Expression wurde mit dysregulierter Proliferation und gestörter epithelialer Homöostase in Verbindung gebracht, was FRK für Studien zur Tumorbiologie, Invasion und linienspezifischen Signalübertragung relevant macht. Als Kinase mit kontextabhängigen Effekten auf Wachstum und Motilität wird Rak häufig untersucht, um Phosphorylierungsnetzwerke und Rückkopplungskontrollen in Stress- und rezeptorgetriebener Signalgebung zu kartieren.
Rak Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des FRK-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von FRK abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die FRK-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit FRK-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.