PRMT8 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404371

Panoramica

PRMT8 (protein arginine methyltransferase 8) è una PRMT di tipo I associata alla membrana che catalizza la dimetilazione asimmetrica di residui di arginina su substrati proteici, modulando le interazioni proteina–proteina, la localizzazione subcellulare e l’output di segnalazione. Contribuisce alla regolazione delle reti di modificazioni post-traduzionali che si interfacciano con la dinamica del citoscheletro, il traffico vescicolare e le vie di trasduzione del segnale plasmate dalla metilazione dell’arginina. L’attività di PRMT8 è collegata al controllo di processi neuronali e sinaptici e i programmi di metilazione alterati della famiglia PRMT sono spesso studiati in contesti di neurobiologia, differenziamento cellulare e segnalazione oncogenica. La metilazione dell’arginina disregolata e il rimodellamento dei substrati associato alle PRMT sono inoltre oggetto di studio per i loro ruoli nelle risposte allo stress e nei cambiamenti della proteostasi osservati in molteplici modelli rilevanti per le malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRMT8 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRMT8 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRMT8 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRMT8 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRMT8.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRMT8 per lo studio della segnalazione di PRMT8, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRMT8 critici per la funzione di PRMT8
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRMT8 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRMT8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PRMT8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRMT8. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRMT8 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PRMT8 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRMT8 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRMT8 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.