PRMT7 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-431946

Panoramica

Prmt7 codifica PRMT7, una metiltransferasi di arginina proteica di tipo III che catalizza la dimetilazione simmetrica dei residui di arginina su substrati istonici e non istonici, contribuendo così a modellare l’organizzazione della cromatina e i programmi trascrizionali. L’attività di PRMT7 si intreccia con la regolazione epigenetica, il processamento dell’RNA e la segnalazione adattativa allo stress, influenzando la specificazione di linea e il mantenimento dell’identità cellulare nei sistemi dei mammiferi. Nei modelli murini, Prmt7 è stato collegato alla regolazione della funzione delle cellule staminali muscolari, allo sviluppo neuronale e alle risposte trascrizionali immuno-correlate attraverso la modulazione dell’accessibilità della cromatina e delle reti di espressione genica. Una metilazione dipendente da PRMT7 deregolata è stata associata a stati di differenziamento alterati e a fenotipi rilevanti per disturbi dello sviluppo e metabolici, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo epigenetico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRMT7 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prmt7 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prmt7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prmt7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRMT7.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prmt7 per lo studio della segnalazione di PRMT7, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Prmt7 critici per la funzione di PRMT7
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prmt7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRMT7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PRMT7 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prmt7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRMT7 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PRMT7 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prmt7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prmt7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.