PRAP1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423619

Panoramica

La proteina acida ricca di prolina 1 (PRAP1), codificata dal gene murino Prap1, è un fattore associato all’epitelio, particolarmente abbondante nei tessuti gastrointestinali e collegato alle risposte cellulari allo stress del lume. L’espressione di PRAP1 è regolata da segnali infiammatori e da fattori di crescita, incluse vie a valle di STAT e reti di recettori nucleari che modellano la funzione della barriera mucosale. Tra i ruoli riportati figurano la modulazione dei programmi di sopravvivenza, differenziazione e rigenerazione dell’epitelio durante danno tissutale e riparazione. La disregolazione di PRAP1 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi intestinale e a contesti patologici legati all’infiammazione, rendendola utile per studiare i meccanismi che collegano l’adattamento allo stress epiteliale all’integrità della barriera.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PRAP1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Prap1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Prap1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Prap1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PRAP1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Prap1 per lo studio della segnalazione di PRAP1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Prap1 critici per la funzione di PRAP1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Prap1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PRAP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PRAP1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Prap1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PRAP1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PRAP1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Prap1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Prap1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.