PPARα Plasmide Double Nickase (h): sc-400238-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PPARα Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PPARα Double Nickase Plasmid (h) e il PPARα Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PPARA. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PPARα Antibody (H-2): sc-398394
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PPARα Plasmide Double Nickase (h) | sc-400238-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PPARα Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400238-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPARA codifica il recettore alfa attivato dai proliferatori dei perossisomi (PPARα), un recettore nucleare regolato da ligandi che forma un eterodimero con RXR per controllare la trascrizione di geni coinvolti nell’assorbimento degli acidi grassi, nella β‑ossidazione e nel metabolismo delle lipoproteine. PPARα coordina l’adattamento metabolico nel fegato, nel cuore, nel muscolo scheletrico e in altri tessuti ossidativi, integrando segnali nutrizionali e lipidici con le vie energetiche mitocondriali e perossisomiali. Attraverso la regolazione della gestione dei lipidi, della chetogenesi e del tono infiammatorio, PPARα collega l’equilibrio energetico cellulare alle risposte allo stress e alla segnalazione immunometabolica. Un’attività alterata di PPARA è stata associata a dislipidemia, fenotipi di steatosi epatica, insulino-resistenza e, più in generale, alla biologia delle malattie cardiometaboliche, rendendolo un bersaglio chiave per studi meccanicistici della regolazione metabolica.
PPARα Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PPARA nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PPARA. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PPARA. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PPARA interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.