PMCA1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402691-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PMCA1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PMCA1 Double Nickase Plasmid (h) e il PMCA1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ATP2B1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PMCA1 Antibody (F-10): sc-398413
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PMCA1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402691-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PMCA1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-402691-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP2B1 codifica l’ATPasi trasportatrice di Ca2+ della membrana plasmatica 1 (PMCA1), una pompa di efflusso del Ca2+ ad alta affinità che mantiene basse le concentrazioni di calcio nel citosol e modella la dinamica della segnalazione calcio-dipendente. PMCA1 accoppia l’idrolisi dell’ATP all’estrusione del Ca2+, sostenendo processi quali eccitabilità, secrezione, progressione del ciclo cellulare e trascrizione calcio-dipendente attraverso vie collegate alla calmodulina, alla calcineurina/NFAT e alla segnalazione CaMK. Regolando microdomini locali di Ca2+ alla membrana plasmatica, PMCA1 influenza la funzione endoteliale e della muscolatura liscia, l’omeostasi neuronale e l’integrità delle barriere. Alterazioni genetiche e funzionali di ATP2B1 sono state associate a fenotipi cardiovascolari e neurovascolari, inclusa la regolazione della pressione arteriosa e difetti nella gestione del calcio, rilevanti per la modellizzazione meccanicistica delle malattie in cellule umane.
PMCA1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ATP2B1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ATP2B1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ATP2B1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ATP2B1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.