PLIC-2 Plasmide Double Nickase (m): sc-424895-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PLIC-2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PLIC-2 Double Nickase Plasmid (m) e il PLIC-2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ubqln2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PLIC-2 Antibody (QR-2): sc-100612
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PLIC-2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-424895-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Ubqln2 codifica PLIC-2 (ubiquilina-2), un adattatore ubiquitina-simile/associato all’ubiquitina che convoglia i substrati poliubiquitinati al proteasoma 26S e sostiene il controllo di qualità delle proteine. PLIC-2 partecipa al flusso del sistema ubiquitina–proteasoma, alla degradazione associata al reticolo endoplasmatico (ERAD) e al turnover di proteine mal ripiegate o aggregate, influenzando le risposte cellulari allo stress e la proteostasi. Attraverso interazioni con subunità del proteasoma e con catene di ubiquitina, contribuisce a regolare la segnalazione legata alla degradazione e può modulare il crosstalk tra autofagia e proteasoma in condizioni di stress proteotossico. La disregolazione della funzione della famiglia UBQLN2 è stata collegata a fenotipi di aggregazione proteica e a vie rilevanti per la neurodegenerazione, rendendo l’alterazione di Ubqln2 utile per studi meccanicistici sulla proteostasi neuronale e sulla segnalazione da stress.
PLIC-2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ubqln2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ubqln2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ubqln2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ubqln2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.