plexin-A1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403043-ACT

Il gene umano **PLXNA1** codifica la plexina-A1, un recettore transmembrana che si lega alle semaforine di classe 3 in partnership con le neuropiline per regolare segnali di guida che controllano il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione e la migrazione cellulare direzionale. La segnalazione mediata da plexina-A1 interagisce con le GTPasi della famiglia Rho e con reti di chinasi a valle per coordinare l’orientamento degli assoni, la strutturazione dendritica e il traffico delle cellule immunitarie. In contesti non neuronali, PLXNA1 contribuisce all’organizzazione dei tessuti e alle interazioni vascolari e stromali modulando la motilità e le risposte dipendenti dal contatto. Una deregolazione della segnalazione semaforina–plexina che coinvolge PLXNA1 è stata associata ad alterazioni dei processi neuroevolutivi e ai comportamenti del microambiente tumorale, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici delle vie di guida e migrazione.

plexin-A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PLXNA1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

plexin-A1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PLXNA1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PLXNA1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di plexin-A1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PLXNA1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da plexin-A1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via plexin-A1 nelle cellule tumorali con espressione di PLXNA1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.