Pitx2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-401426-LAC

PITX2 codifica per il fattore di trascrizione con homeodominio di tipo paired-like Pitx2, un regolatore chiave della patterning embrionale e dell’organogenesi che contribuisce a specificare l’asimmetria sinistra-destra e coordina lo sviluppo di cuore, occhio, strutture craniofacciali e muscolo scheletrico. Pitx2 integra segnali a monte provenienti dalle vie Wnt/β-catenina, TGF-β/Nodal e dell’acido retinoico per controllare programmi trascrizionali specifici di linea, la differenziazione cellulare e la morfogenesi dei tessuti. Un’attività di PITX2 deregolata è stata associata a malformazioni congenite ed è spesso studiata in contesti quali lo sviluppo atriale e la suscettibilità alle aritmie, la disgenesia del segmento anteriore e i fenotipi craniofacciali. In biologia del cancro, l’espressione di PITX2 e la sua regolazione epigenetica sono state investigate per il loro ruolo nelle transizioni di stato delle cellule tumorali, nelle reti trascrizionali associate all’invasione e nel cross-talk tra vie di segnalazione.

Le particelle di attivazione lentivirale Pitx2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PITX2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Pitx2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PITX2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Pitx2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PITX2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.