Pim-2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401715-ACT

PIM2 kodiert Pim-2, eine konstitutiv aktive Serin/Threonin-Kinase, die Zytokin- und Wachstumsfaktorsignale integriert, um Zellüberleben, Proliferation und metabolische Anpassung zu fördern. Pim-2 phosphoryliert Signal- und Apoptoseregulatoren, unterstützt die Kontrolle der Translation und die Resistenz gegenüber zellulärem Stress und greift funktionell in Programme ein, die mit JAK/STAT, PI3K/AKT/mTOR und NF-κB assoziiert sind. Eine dysregulierte PIM2-Expression oder -Aktivität wurde mit einer veränderten Homöostase hämatopoetischer Zellen und mit onkogenen Signalnetzwerken in Verbindung gebracht, insbesondere in Kontexten, in denen Überlebenswege dauerhaft aktiviert sind. Als Modulator phosphorylierungsabhängiger Kontrollpunkte wird Pim-2 in Modellsystemen häufig im Hinblick auf seine Effekte auf Apoptose, Zellzyklusprogression und therapieassoziierte Antwortphänotypen untersucht.

Pim-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PIM2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Pim-2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PIM2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PIM2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Pim-2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PIM2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Pim-2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Pim-2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PIM2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.