Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
PIDD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403439
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PIDD Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PIDD, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PIDD Antibody (B-5): sc-514981
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PIDD Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-403439 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
PIDD1 codifica la proteina PIDD (p53-induced death domain protein), una proteina scaffold di segnalazione implicata nelle risposte allo stress cellulare e nella regolazione dell’apoptosi. PIDD partecipa alla formazione di complessi multiproteici come il PIDDosoma, collegando lo stress genotossico all’attivazione della caspasi-2 e alle successive decisioni sul destino cellulare. Oltre all’apoptosi, PIDD è stato associato a processi legati al centrosoma e alla segnalazione del danno al DNA che influenzano il controllo del ciclo cellulare e la stabilità genomica. La disregolazione di queste vie è rilevante negli studi di biologia del cancro, fenotipi del neurosviluppo e altre condizioni in cui risultano alterati la segnalazione dello stress, l’apoptosi o il mantenimento dei cromosomi.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PIDD (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PIDD1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PIDD1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PIDD1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PIDD.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PIDD1 per lo studio della segnalazione di PIDD, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PIDD1 critici per la funzione di PIDD
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PIDD1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PIDD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PIDD CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PIDD1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PIDD Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PIDD (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PIDD1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PIDD1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.