PIASx CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403954
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- PIASx Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im PIASx-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PIASx: sc-166494
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PIASx CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) | sc-403954 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
PIAS2 kodiert PIASx, eine SUMO-E3-Ligase und einen transkriptionellen Koregulator, der über SUMOylierung die Proteinstabilität, die subzelluläre Lokalisation und die Transkriptionsleistung moduliert. PIASx integriert Signale aus Zytokin- und Wachstumsfaktor-Signalwegen, indem es Faktoren wie Mitglieder der STAT-Familie, nukleäre Hormonrezeptoren und Komponenten der DNA-Schadensantwort reguliert und dadurch den Zellzyklusverlauf, die Apoptose sowie immunbezogene Transkriptionsprogramme beeinflusst. Über seine Rollen bei posttranslationalen Modifikationen und im Gleichgewicht zwischen transkriptioneller Repression und Aktivierung wurde PIASx mit fehlregulierten Signalnetzwerken in der Krebsbiologie, bei Entzündungen und bei Stressantwort-Phänotypen in Verbindung gebracht. Eine veränderte PIAS2-Aktivität kann die Genomstabilität und das Crosstalk zwischen Signalwegen beeinflussen, wodurch es für mechanistische Studien zur Transkriptionsregulation und Signaltreue relevant ist.
Das PIASx CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des PIAS2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des PIAS2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von PIAS2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die PIASx-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von PIAS2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der PIASx-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf PIAS2-Exone abzielen, die für die PIASx-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere PIAS2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom PIASx CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom PIASx CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des PIAS2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das PIASx HDR-Plasmid (h) und PIASx HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von PIAS2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten PIAS2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.