PIASx Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403954
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PIASx O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PIASx, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PIASx Anticorpo (D-12): sc-166494
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PIASx Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-403954 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
PIAS2 codifica a PIASx, uma ligase E3 de SUMO e correagulador transcricional que modula a estabilidade proteica, a localização subcelular e a atividade transcricional por meio da SUMOilação. PIASx integra sinais de vias de citocinas e de fatores de crescimento ao regular fatores como membros da família STAT, receptores hormonais nucleares e componentes da resposta a danos no DNA, influenciando assim a progressão do ciclo celular, a apoptose e programas transcricionais relacionados à imunidade. Por suas funções no equilíbrio entre modificação pós-traducional e repressão/ativação transcricional, PIASx tem sido associado a redes de sinalização desreguladas observadas na biologia do câncer, na inflamação e em fenótipos de resposta ao estresse. Alterações na atividade de PIAS2 podem afetar a manutenção do genoma e o crosstalk entre vias, tornando-o relevante para estudos mecanísticos de regulação transcricional e fidelidade de sinalização.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PIASx (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PIAS2 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PIAS2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PIAS2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PIASx.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PIAS2 para a investigação da sinalização de PIASx, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PIAS2 críticos para a função PIASx
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PIAS2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PIASx Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PIASx Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PIAS2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PIASx Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PIASx (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PIAS2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PIAS2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.