PGC1a Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422364-ACT

Ppargc1a codifica il coattivatore trascrizionale PGC1a, un regolatore centrale della biogenesi mitocondriale e del metabolismo ossidativo nei tessuti murini ad alta richiesta energetica. PGC1a coordina programmi di recettori nucleari e fattori di trascrizione, inclusi i segnali PPAR, NRF1/2 ed ERR, per modulare l’ossidazione degli acidi grassi, la fosforilazione ossidativa e le difese antiossidanti. La sua attività integra segnali nutrizionali e di stress attraverso vie come AMPK e la deacetilazione dipendente dalle sirtuine, plasmando la flessibilità metabolica e l’equilibrio redox cellulare. Un’espressione deregolata di Ppargc1a è stata collegata a fenotipi della sindrome metabolica, al rimodellamento muscolare e cardiaco e a disfunzioni mitocondriali associate alla neurodegenerazione, rendendolo un bersaglio frequente negli studi meccanicistici dell’omeostasi energetica.

PGC1a Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Ppargc1a senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PGC1a Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Ppargc1a nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Ppargc1a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PGC1a. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Ppargc1a nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PGC1a nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PGC1a nelle cellule tumorali con espressione di Ppargc1a silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.