PDK4 Plasmide Double Nickase (h): sc-401355-NIC

PDK4 codifica la piruvato deidrogenasi chinasi 4, un enzima mitocondriale che fosforila e inibisce il complesso della piruvato deidrogenasi, riducendo così la conversione del piruvato in acetil‑CoA e spostando il flusso di carbonio dall’ossidazione del glucosio verso l’utilizzo degli acidi grassi. La sua espressione è regolata dallo stato nutrizionale e dagli ormoni e integra segnali provenienti da vie quali la segnalazione PPAR, il controllo trascrizionale mediato da insulina/FOXO e i meccanismi di sensing energetico cellulare che modulano il metabolismo mitocondriale. Un’attività alterata di PDK4 è associata al rimodellamento metabolico e allo switch dei substrati mitocondriali osservati in contesti quali insulino‑resistenza, obesità, diabete di tipo 2 e stress metabolico cardiaco. Poiché PDK4 influenza l’apporto alla fosforilazione ossidativa e la disponibilità di acetil‑CoA, è spesso studiata in modelli di adattamento metabolico, stress ossidativo e rimodulazione del metabolismo energetico legata all’infiammazione.

PDK4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PDK4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PDK4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PDK4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PDK4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.