Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
PAC-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401917
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PAC-1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico PAC-1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PAC-1 Antibody (4O21): sc-32776
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PAC-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401917 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
La fosfatasi a doppia specificità 2 (DUSP2), nota anche come PAC-1, è una fosfatasi delle MAP chinasi che defosforila ERK1/2 e p38 attivate, modulando così l’intensità e la durata della segnalazione MAPK. Nei contesti immunitari ed ematopoietici umani, DUSP2 contribuisce al controllo, dipendente dallo stimolo, di programmi trascrizionali guidati dalle citochine, della proliferazione e dell’apoptosi, agendo come regolatore di feedback negativo delle cascate MAPK. La sua espressione è spesso inducibile nei linfociti attivati e può modulare vie a valle collegate alla segnalazione infiammatoria e alle risposte allo stress. Un’attività o un’espressione disregolata di DUSP2 è stata associata a disfunzioni immunitarie e a fenotipi di segnalazione correlati al cancro, rendendola un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo della via MAPK.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PAC-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene DUSP2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del DUSP2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto DUSP2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PAC-1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di DUSP2 per lo studio della segnalazione di PAC-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni DUSP2 critici per la funzione di PAC-1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di DUSP2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal PAC-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PAC-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus DUSP2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal PAC-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PAC-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia DUSP2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio DUSP2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.