p38 beta MAPK11 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400173-ACT

MAPK11 codifica p38β, una chinasi attivata dallo stress della famiglia p38 MAPK che integra segnali extracellulari quali citochine infiammatorie, stress ossidativo ed esposizione ai raggi UV in output di segnalazione dipendenti dalla fosforilazione. p38β modula programmi trascrizionali e la regolazione post-trascrizionale che controllano la produzione di citochine, i checkpoint del ciclo cellulare, l’apoptosi e la differenziazione, attraverso substrati a valle che includono le protein-chinasi attivate da MAPK e fattori di trascrizione. L’attività di MAPK11 contribuisce alla segnalazione dell’immunità innata e a più ampie vie di risposta allo stress che intersecano l’infiammazione regolata da NF-κB e il crosstalk della rete MAPK. Una segnalazione p38 deregolata è stata associata, in modo dipendente dal contesto, a processi infiammatori e neurodegenerativi e alla biologia tumorale, a supporto di studi meccanicistici sul rimodellamento delle vie e sull’adattamento allo stress.

p38 beta MAPK11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAPK11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

p38 beta MAPK11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAPK11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAPK11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di p38 beta MAPK11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAPK11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da p38 beta MAPK11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via p38 beta MAPK11 nelle cellule tumorali con espressione di MAPK11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.