P2Y7 Plasmide Double Nickase (h): sc-403664-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- P2Y7 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il P2Y7 Double Nickase Plasmid (h) e il P2Y7 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira LTB4R. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
P2Y7 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403664-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P2Y7 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403664-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LTB4R codifica il recettore 1 del leucotriene B4 (BLT1), un recettore accoppiato a proteine G (GPCR) che trasduce i segnali del leucotriene B4 attivando il flusso PLCβ/Ca2+, le cascate MAPK e programmi chemiotattici dipendenti da PI3K nelle cellule mieloidi e in altre cellule immunitarie. La segnalazione di BLT1 coordina l’adesione, la migrazione e la degranulazione dei leucociti, collegando il riconoscimento dei mediatori lipidici alla regolazione delle reti infiammatorie. Un’attività deregolata di LTB4R è stata associata a fenotipi infiammatori cronici e a danno tissutale mediato dal sistema immunitario in diversi contesti patologici, a supporto del suo impiego come bersaglio per studi meccanicistici delle vie dei leucotrieni. Nella ricerca biomedica, la perturbazione di LTB4R consente di analizzare il traffico cellulare guidato dai GPCR, il rilascio di citochine e il crosstalk con il metabolismo degli eicosanoidi e la segnalazione dell’immunità innata.
P2Y7 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus LTB4R nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di LTB4R. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di LTB4R. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con LTB4R interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.