OLIG2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424530-ACT

Olig2 codifica OLIG2, un fattore di trascrizione basic helix-loop-helix che coordina la specificazione delle linee cellulari neurali nel sistema nervoso centrale del topo in sviluppo e nell’adulto. OLIG2 si integra con reti regolatorie proneurali e gliali per controllare la proliferazione, la migrazione e le decisioni di destino dei progenitori, con ruoli di primo piano nella differenziazione dei motoneuroni e degli oligodendrociti e nei programmi genici associati alla mielina. La sua attività interseca vie di segnalazione dello sviluppo che modellano il patterning neurale e lo stato della cromatina, influenzando i programmi trascrizionali che definiscono l’identità regionale. L’espressione deregolata di OLIG2 e i programmi di linea cellulare correlati sono spesso studiati nei disturbi del neurosviluppo, nelle patologie demielinizzanti e nella biologia dei gliomi come modelli di comportamento aberrante dei progenitori e di controllo del destino gliale.

OLIG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Olig2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OLIG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Olig2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Olig2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OLIG2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Olig2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OLIG2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OLIG2 nelle cellule tumorali con espressione di Olig2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.