OBSL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-407284-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- OBSL1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il OBSL1 Double Nickase Plasmid (h) e il OBSL1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira OBSL1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
OBSL1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-407284-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
OBSL1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-407284-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
OBSL1 (obscurin-like protein 1) codifica una grande proteina adattatrice del citoscheletro che si localizza in strutture associate all’actina e contribuisce all’architettura cellulare, all’adesione e alla meccanotrasduzione. Attraverso interazioni di tipo “scaffold”, OBSL1 favorisce l’organizzazione di complessi proteici che influenzano la dinamica del citoscheletro, il traffico intracellulare e la segnalazione a livello della corteccia cellulare. Varianti con perdita di funzione in OBSL1 sono associate alla sindrome 3M, un disturbo della crescita che mette in evidenza il ruolo del gene nella proliferazione cellulare e nell’integrità strutturale. In ambito di ricerca, OBSL1 viene studiato nel contesto di vie regolate dal citoscheletro, dell’accoppiamento con la matrice extracellulare e della segnalazione responsiva allo stress che modellano lo sviluppo dei tessuti e la morfologia cellulare.
OBSL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus OBSL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di OBSL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di OBSL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con OBSL1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.