Nup153 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403206-ACT

Il gene umano **NUP153** codifica **Nup153**, una nucleoporina dinamica del complesso del poro nucleare che contribuisce al trasporto nucleare, all’assemblaggio del poro e all’organizzazione dell’architettura del cestello nucleare. Nup153 interagisce con le vie di importazione/esportazione mediate dalle carioferine e influenza il posizionamento della cromatina e i programmi trascrizionali coordinando le interazioni alla periferia nucleare. Regolando il traffico nucleo-citoplasmatico e la regolazione genica associata all’involucro nucleare, NUP153 sostiene la progressione del ciclo cellulare e i processi di mantenimento del genoma. La disregolazione dei componenti del trasporto nucleare, incluse le reti associate a Nup153, è spesso studiata nel contesto della segnalazione proliferativa, delle risposte allo stress e di alterazioni dell’architettura nucleare rilevanti per la malattia.

Nup153 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NUP153 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nup153 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NUP153 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NUP153, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nup153. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NUP153 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nup153 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nup153 nelle cellule tumorali con espressione di NUP153 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.