NTR1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402552-NIC

NTSR1 codifica il recettore della neurotensina 1 (NTR1), un GPCR di classe A che lega il neuropeptide neurotensina per regolare la segnalazione intracellulare attraverso la mobilizzazione di Ca²⁺ guidata da Gαq/PLCβ e l’attivazione di PKC, con un ulteriore accoppiamento alle vie MAPK/ERK e al trafficking mediato da β-arrestina. NTR1 influenza la neurotrasmissione, la contrazione della muscolatura liscia e i processi secretori tramite desensibilizzazione e internalizzazione del recettore, nonché attraverso il cross-talk con altre vie di GPCR. Alterazioni dell’espressione e della segnalazione di NTSR1 sono state associate a programmi proliferativi e infiammatori deregolati in molteplici contesti rilevanti per la malattia, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sulle dinamiche della segnalazione dei GPCR. Essendo un recettore di membrana con rapida endocitosi indotta dal ligando, NTR1 è anche ampiamente utilizzato per investigare la farmacologia recettoriale, la segnalazione compartimentalizzata e le risposte trascrizionali a valle.

NTR1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NTSR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NTSR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NTSR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NTSR1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.