Nrf2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400017-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Nrf2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Nrf2 Double Nickase Plasmid (h) e il Nrf2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NFE2L2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Nrf2 Antibody (H-6): sc-518033
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Nrf2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400017-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nrf2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400017-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFE2L2 codifica il fattore nucleare eritroide 2–correlato 2 (Nrf2), un fattore di trascrizione della famiglia bZIP (basic leucine zipper) che coordina la difesa cellulare contro lo stress ossidativo ed elettrofilo. Dopo la stabilizzazione e la traslocazione nel nucleo, Nrf2 si lega agli elementi di risposta antiossidante (ARE) per indurre geni coinvolti nella sintesi del glutatione, nella detossificazione degli xenobiotici, nella rigenerazione del NADPH e nella proteostasi, integrando il controllo redox con il metabolismo e la segnalazione infiammatoria. Questa via interseca l’ubiquitinazione dipendente da KEAP1, la segnalazione MAPK e la regolazione dell’autofagia, modulando le risposte alla disfunzione mitocondriale e ai tossici ambientali. Un’attività di Nrf2 deregolata è stata associata a una tolleranza allo stress alterata e a una riprogrammazione metabolica in diversi contesti rilevanti per la malattia, inclusi la carcinogenesi, la neurodegenerazione e gli stati infiammatori cronici.
Nrf2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NFE2L2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NFE2L2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NFE2L2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NFE2L2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.