NPT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402216

Panoramica

SLC34A1 codifica il trasportatore umano sodio-dipendente del fosfato 2A (NPT2), un cotrasportatore della membrana apicale che media l’assorbimento elettrogenico di fosfato inorganico accoppiato ai gradienti di Na+ nelle cellule epiteliali. NPT2 è un determinante chiave dell’omeostasi del fosfato e partecipa alle vie di riassorbimento nel tubulo prossimale renale, che intersecano il metabolismo della vitamina D, la segnalazione dell’ormone paratiroideo e la gestione del fosfato regolata da FGF23. Alterazioni della funzione di SLC34A1 sono state associate a disturbi dell’equilibrio del fosfato, inclusi fenotipi legati a nefrolitiasi, ipofosfatemia e difetti di mineralizzazione, rendendolo rilevante per lo studio della regolazione del trasporto epiteliale e della segnalazione metabolica. A livello cellulare, la perturbazione di SLC34A1 può essere utilizzata per indagare il traffico di membrana, la cinetica del trasportatore e il controllo, dipendente dal fosfato, della bioenergetica e del metabolismo della biomineralizzazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NPT2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC34A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC34A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC34A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NPT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC34A1 per lo studio della segnalazione di NPT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC34A1 critici per la funzione di NPT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC34A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NPT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NPT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC34A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NPT2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NPT2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC34A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC34A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.