NOR-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401813

Panoramica

NR4A3 codifica il recettore nucleare orfano NOR-1 (NR4A3), un fattore di trascrizione a risposta immediata, indipendente dal ligando, che collega rapidamente gli stimoli extracellulari ai programmi di espressione genica. NOR-1 regola la differenziazione cellulare, la proliferazione, l’apoptosi e l’adattamento metabolico modulando reti trascrizionali a valle della segnalazione MAPK/ERK e di altre vie sensibili allo stress, e può influenzare l’espressione di geni associati all’infiammazione e alla risposta immunitaria. Un’attività disfunzionale di NR4A3 è stata collegata a fenotipi oncogeni e metabolici, e riarrangiamenti di NR4A3 sono implicati in alcuni sarcomi, a sostegno della sua rilevanza per studi meccanicistici del controllo trascrizionale in contesti legati alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NOR-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NR4A3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NR4A3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NR4A3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NOR-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NR4A3 per lo studio della segnalazione di NOR-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NR4A3 critici per la funzione di NOR-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NR4A3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NOR-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NOR-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NR4A3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NOR-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NOR-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NR4A3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NR4A3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.