Nopp140 Plasmide Double Nickase (h): sc-402907-NIC

NOLC1 codifica la fosfoproteina nucleolare e dei coiled body 1 (Nopp140), una proteina nucleolare altamente fosforilata che fa la spola tra il nucleolo e i corpi di Cajal per sostenere la biogenesi dei ribosomi e la dinamica delle RNP nucleolari (snoRNP) e delle RNP specifiche dei corpi di Cajal (scaRNP). Nopp140 interagisce con componenti centrali dei macchinari di trascrizione e processamento dell’rRNA e contribuisce a organizzare l’architettura nucleolare, collegando la sua funzione all’attività della RNA polimerasi I, alla maturazione del pre-rRNA e alle risposte allo stress nucleolare. L’alterazione di NOLC1 può modificare il processamento dell’rRNA, l’integrità del nucleolo e la progressione del ciclo cellulare, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sul controllo della crescita e sulla segnalazione dello stress. Poiché la disfunzione nucleolare è una caratteristica comune di diversi stati fisiopatologici, NOLC1 viene spesso analizzato come marcatore e regolatore dell’omeostasi nucleolare in modelli cellulari rilevanti per la malattia.

Nopp140 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NOLC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NOLC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NOLC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NOLC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.