Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Nopp140 Double Nickase Plasmid (h): sc-402907-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nopp140 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nopp140 Double-Nickase-Plasmid (h) und Nopp140 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NOLC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nopp140: sc-374033
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nopp140 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402907-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nopp140 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402907-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NOLC1 kodiert das nukleoläre und Coiled-Body-Phosphoprotein 1 (Nopp140), ein stark phosphoryliertes nukleoläres Protein, das zwischen dem Nukleolus und Cajal-Körperchen pendelt, um die Ribosomenbiogenese sowie die Dynamik von kleinen nukleolären RNPs bzw. Cajal-Körperchen-spezifischen RNPs zu unterstützen. Nopp140 interagiert mit Kernkomponenten der Maschinerie für rRNA-Transkription und -Prozessierung und trägt zur Organisation der nukleolären Architektur bei, wodurch seine Funktion mit der Aktivität der RNA-Polymerase I, der Reifung der prä-rRNA und nukleolären Stressantworten verknüpft ist. Eine Störung von NOLC1 kann die rRNA-Prozessierung, die Integrität des Nukleolus und den Verlauf des Zellzyklus verändern und ist daher für mechanistische Studien zur Kontrolle des Zellwachstums und zur Stresssignalgebung relevant. Da eine nukleoläre Dysfunktion ein häufiges Merkmal vielfältiger pathophysiologischer Zustände ist, wird NOLC1 in krankheitsrelevanten Zellmodellen häufig als Marker und Regulator der nukleolären Homöostase untersucht.
Nopp140 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NOLC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NOLC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NOLC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NOLC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.