Noggin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-402090-KO-2

Panoramica

NOG codifica noggin, una glicoproteina secreta che si lega ai ligandi BMP e li neutralizza (in particolare BMP2, BMP4 e BMP7), modulando così i gradienti di segnalazione della superfamiglia BMP/TGF-β durante lo sviluppo e l’omeostasi dei tessuti adulti. Antagonizzando l’attivazione dei recettori BMP e la fosforilazione a valle di SMAD1/5/8, noggin influenza le decisioni sul destino cellulare, la differenziazione osteogenica e condrogenica e i processi di patterning nelle linee mesenchimali e neurali. Un’attività alterata di NOG è associata a una morfogenesi scheletrica e a una formazione articolare disregolate, ed è spesso studiata in contesti che coinvolgono rimodellamento e differenziazione anomali guidati dai BMP. In quanto modulatore extracellulare chiave della segnalazione dei morfogeni, noggin è rilevante per studi di biologia dello sviluppo, biologia di osso e cartilagine e per il cross-talk di via con i programmi WNT e FGF.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Noggin (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NOG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NOG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NOG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Noggin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NOG per lo studio della segnalazione di Noggin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NOG critici per la funzione di Noggin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NOG per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Noggin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Noggin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NOG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Noggin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Noggin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NOG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NOG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.