NLRC5 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-410189-ACT

NLRC5 (NOD-like receptor family CARD domain containing 5) è un regolatore citosolico dell’immunità innata, noto soprattutto come attivatore trascrizionale della presentazione dell’antigene tramite MHC di classe I. Coordina l’espressione delle catene pesanti HLA di classe I, della β2-microglobulina, di TAP1/2 e dei componenti dell’immunoproteasoma, collegando così la segnalazione infiammatoria all’elaborazione e presentazione dell’antigene. Attraverso la modulazione di programmi responsivi all’interferone e di vie associate a NF-κB, NLRC5 influenza il riconoscimento immunitario, il profilo citochinico e le risposte cellulari allo stress. Un’espressione deregolata di NLRC5 è stata associata a un’alterata immunogenicità tumorale, a una maggiore suscettibilità alle infezioni virali e a fenotipi autoimmuni, rendendolo un nodo rilevante per lo studio dell’evasione immunitaria e dei difetti di presentazione dell’antigene.

NLRC5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NLRC5 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NLRC5 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NLRC5 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NLRC5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NLRC5. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NLRC5 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NLRC5 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NLRC5 nelle cellule tumorali con espressione di NLRC5 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.