Nkx-6.3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407505

Panoramica

NKX6-3 codifica il fattore di trascrizione con homeobox Nkx-6.3, un regolatore che si lega al DNA in modo sequenza-specifico ed è coinvolto nei programmi di differenziamento epiteliale e nel mantenimento dell’identità regionale nei tessuti gastrointestinali. In quanto fattore nucleare, Nkx-6.3 contribuisce a modellare le reti trascrizionali che controllano l’impegno di linea, la proliferazione e la maturazione, interfacciandosi con vie più ampie dello sviluppo e del destino cellulare, incluse interazioni (cross-talk) con Wnt/β-catenina e altre cascate di segnalazione associate alla differenziazione. Alterazioni dell’espressione o dell’attività regolatoria di NKX6-3 sono state associate a una compromissione dell’omeostasi mucosale e sono state riportate in studi di patologia gastrointestinale, a supporto della sua rilevanza in modelli di disfunzione epiteliale e di riprogrammazione trascrizionale correlata alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-6.3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NKX6-3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NKX6-3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NKX6-3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Nkx-6.3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NKX6-3 per lo studio della segnalazione di Nkx-6.3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NKX6-3 critici per la funzione di Nkx-6.3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NKX6-3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Nkx-6.3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Nkx-6.3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NKX6-3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Nkx-6.3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Nkx-6.3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NKX6-3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NKX6-3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.