NIPBL Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403371-LAC

NIPBL (proteina tipo Nipped-B) codifica un fattore di caricamento del complesso cohesina che coordina la coesione tra cromatidi fratelli e l’organizzazione della cromatina di ordine superiore, consentendo una corretta segregazione dei cromosomi e risposte al danno al DNA. Facilitando la deposizione della cohesina e stabilizzando contatti a lunga distanza tra enhancer e promotori, NIPBL influenza programmi trascrizionali su scala genomica fondamentali per lo sviluppo embrionale e le decisioni di destino cellulare. La regolazione dipendente da NIPBL si interseca con vie che controllano la tempistica di replicazione, l’allungamento trascrizionale e la riparazione delle rotture a doppio filamento. La disregolazione della funzione di NIPBL è associata a coesinopatie come la sindrome di Cornelia de Lange ed è stata studiata nel contesto di alterazioni dell’architettura della cromatina osservate nel cancro e nei disturbi del neurosviluppo.

Le particelle di attivazione lentivirale NIPBL (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NIPBL in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale NIPBL (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NIPBL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di NIPBL. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NIPBL e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.