NIK Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424749

Panoramica

Map3k14 codifica la NF-κB–inducing kinase (NIK), una MAP3K che funge da regolatore centrale della via non canonica di NF-κB nelle cellule murine. NIK integra i segnali provenienti da specifici membri della superfamiglia dei recettori del TNF per promuovere, tramite IKKα, la conversione di NF-κB2 p100 in p52, plasmando così programmi trascrizionali che controllano l’organogenesi dei tessuti linfoidi, la maturazione delle cellule B, la funzione delle cellule dendritiche e le reti di citochine infiammatorie. Un controllo rigoroso della stabilità di NIK è fondamentale per l’omeostasi immunitaria e una segnalazione di NIK deregolata è stata collegata a infiammazione cronica, disfunzioni del sistema immunitario e processi oncogenici nei compartimenti linfoidi e stromali. In quanto nodo di segnalazione a monte di NF-κB2/RelB, NIK viene spesso studiata in contesti quali fenotipi simili all’autoimmunità, rimodellamento immunitario guidato dalle infezioni e microambienti infiammatori associati ai tumori.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NIK (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Map3k14 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Map3k14 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Map3k14 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NIK.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Map3k14 per lo studio della segnalazione di NIK, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Map3k14 critici per la funzione di NIK
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Map3k14 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NIK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NIK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Map3k14. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NIK Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NIK (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Map3k14 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Map3k14 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.