Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403376-ACT

CHRNA2 codifica la subunità α2 dei recettori nicotinici neuronali dell’acetilcolina (nAChR), canali cationici attivati da ligando che si assemblano come pentameri per mediare una rapida neurotrasmissione colinergica. In seguito al legame di acetilcolina o nicotina, i recettori contenenti CHRNA2 promuovono l’ingresso di Na⁺ e Ca²⁺, influenzando l’eccitabilità di membrana e le vie di segnalazione dipendenti dall’attività che modellano la plasticità sinaptica e la dinamica dei circuiti. Nel sistema nervoso centrale, alterazioni della composizione delle subunità degli nAChR possono modulare il rilascio di neurotrasmettitori e i programmi trascrizionali a valle dipendenti dal calcio. Le variazioni genetiche e di espressione che coinvolgono CHRNA2 sono state studiate nel contesto di fenotipi neuropsichiatrici e del neurosviluppo, nei quali le alterazioni della segnalazione colinergica sono implicate nel funzionamento delle reti neuronali rilevanti per la patologia.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CHRNA2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CHRNA2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CHRNA2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CHRNA2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 nelle cellule tumorali con espressione di CHRNA2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.