Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403376-ACT

CHRNA2 kodiert die α2‑Untereinheit neuronaler nikotinischer Acetylcholinrezeptoren (nAChRs), ligandengesteuerter Kationenkanäle, die sich als Pentamere zusammenlagern und eine schnelle cholinerge Neurotransmission vermitteln. Nach Bindung von Acetylcholin oder Nikotin fördern CHRNA2‑haltige Rezeptoren den Einstrom von Na⁺ und Ca²⁺ und beeinflussen damit die Membranerregbarkeit sowie aktivitätsabhängige Signalwege, die synaptische Plastizität und die Dynamik neuronaler Schaltkreise prägen. Im zentralen Nervensystem kann eine veränderte Untereinheitenzusammensetzung von nAChRs die Neurotransmitterfreisetzung und nachgeschaltete calciumabhängige Transkriptionsprogramme modulieren. Genetische und Expressionsveränderungen, an denen CHRNA2 beteiligt ist, wurden im Zusammenhang mit neuropsychiatrischen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen untersucht, bei denen Störungen der cholinergen Signalübertragung als relevant für krankheitsbezogene Funktionen neuronaler Netzwerke gelten.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CHRNA2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CHRNA2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CHRNA2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CHRNA2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nicotinic Acetylcholine Receptor alpha 2/CHRNA2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CHRNA2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.