NFATc2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400422

Panoramica

NFATC2 codifica NFATc2, un fattore di trascrizione regolato dal calcio/calcineurina che coordina programmi di espressione genica a valle della segnalazione del recettore dei linfociti T e di altre vie mediate da immunorecettori. In seguito alla defosforilazione, NFATc2 trasloca nel nucleo e coopera con AP-1 e altri cofattori per regolare la produzione di citochine, la differenziazione indotta dall’attivazione e la tolleranza immunitaria. L’attività di NFATc2 integra la segnalazione del Ca²⁺ con il crosstalk tra MAPK e NF-κB, modellando la proliferazione dei linfociti e la funzione effettrice. Una segnalazione di NFATC2 deregolata è stata implicata in fenotipi infiammatori e autoimmuni ed è anche oggetto di studio per i suoi ruoli nelle interazioni tra tumore e sistema immunitario e in stati trascrizionali aberranti nella biologia del cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NFATc2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NFATC2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NFATC2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NFATC2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NFATc2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NFATC2 per lo studio della segnalazione di NFATc2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NFATC2 critici per la funzione di NFATc2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NFATC2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NFATc2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NFATc2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NFATC2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NFATc2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NFATc2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NFATC2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NFATC2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.