NFκB p50 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421876

Panoramica

Nfkb1 codifica NFκB p50, un componente fondamentale di legame al DNA della famiglia dei fattori di trascrizione NF-κB, generato tramite processamento del precursore p105. NFκB p50 partecipa alla segnalazione canonica di NF-κB a valle di recettori quali TNFR, IL-1R e i recettori Toll-like, regolando l’espressione di geni infiammatori, le risposte immunitarie innate e adattative, la sopravvivenza cellulare e la segnalazione da stress. A seconda della composizione del dimero, i complessi contenenti p50 possono attivare la trascrizione (ad es. con RelA/p65) oppure reprimerla (ad es. gli omodimeri di p50), modulando i programmi citochinici e la funzione di macrofagi e linfociti. La disregolazione delle vie guidate da Nfkb1 è ampiamente impiegata come collegamento meccanicistico nei modelli murini di infiammazione cronica, autoimmunità, infezione e microambienti infiammatori che promuovono la tumorigenesi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NFκB p50 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Nfkb1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Nfkb1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Nfkb1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NFκB p50.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Nfkb1 per lo studio della segnalazione di NFκB p50, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Nfkb1 critici per la funzione di NFκB p50
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Nfkb1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NFκB p50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NFκB p50 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Nfkb1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NFκB p50 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NFκB p50 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Nfkb1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Nfkb1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.