Neurogenin 1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421860-ACT

Neurog1 codifica per Neurogenin 1, un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix che agisce come regolatore maestro della neurogenesi nel sistema nervoso del topo. Promuove l’impegno verso la linea neuronale e la differenziazione attivando programmi trascrizionali proneurali e coordinando l’uscita dal ciclo cellulare, interfacciandosi con reti di segnalazione dello sviluppo come l’inibizione laterale mediata da Notch/Delta e le cascate di fattori neurogenici bHLH. L’attività di Neurogenin 1 modella lo sviluppo dei neuroni sensoriali e il patterning neuronale della corteccia, del midollo spinale e di altri distretti; la deregolazione dei programmi di differenziazione neurogenica è rilevante per lo studio di disturbi neuroevolutivi congeniti, difetti di patterning del tubo neurale e anomalie nella specificazione del destino neuronale. Poiché si colloca a monte di molti marcatori di sottotipo neuronale e di effettori della differenziazione, Neurog1 è ampiamente utilizzato per analizzare il controllo trascrizionale delle dinamiche delle cellule staminali/progenitrici neurali e della maturazione neuronale.

Neurogenin 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Neurog1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Neurogenin 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Neurog1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Neurog1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Neurogenin 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Neurog1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Neurogenin 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Neurogenin 1 nelle cellule tumorali con espressione di Neurog1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.