Neu4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406284

Panoramica

NEU4 codifica la neuraminidasi umana 4 (Neu4), una sialidasi che rimuove gli acidi sialici terminali da glicoproteine e glicolipidi, modulando così il turnover dei glicoconiugati e la segnalazione sulla superficie cellulare e a livello degli organelli. L’attività di Neu4 influenza gli stati di sialilazione lisosomiale e mitocondriale e può incidere su processi quali il traffico di membrana, l’autofagia e le risposte allo stress metabolico attraverso la modifica della composizione dei glicani. Rimodellando le interazioni dipendenti dalla sialilazione, NEU4 contribuisce alla regolazione della segnalazione immunitaria e delle decisioni sul destino cellulare in contesti in cui i pattern di glicosilazione vengono riorganizzati. Un’attività sialidasica disregolata e una sialilazione aberrante sono state associate a fenotipi infiammatori e a cambiamenti legati al cancro nell’adesione e nell’invasione cellulare, rendendo NEU4 un bersaglio utile per studi meccanicistici di glicobiologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Neu4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NEU4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NEU4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NEU4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Neu4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NEU4 per lo studio della segnalazione di Neu4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NEU4 critici per la funzione di Neu4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NEU4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Neu4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Neu4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NEU4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Neu4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Neu4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NEU4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NEU4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.