Neu2 Plasmide Double Nickase (h): sc-408479-NIC

Il gene umano **NEU2** codifica la neuraminidasi citosolica 2 (Neu2), una sialidasi che rimuove gli acidi sialici terminali da glicoproteine e glicolipidi, modulando così la composizione e il turnover dei glicoconiugati cellulari. Regolando lo stato di sialilazione, NEU2 influenza la segnalazione dipendente dai glicani, la dinamica di membrana e i processi del metabolismo dei carboidrati che si intrecciano con le vie che controllano la differenziazione e le risposte allo stress. Un’attività sialidasica alterata e pattern di sialilazione aberranti sono stati associati a interazioni cellula–cellula disregolate e a fenotipi oncogenici, rendendo NEU2 un bersaglio utile per studiare come il rimodellamento della glicosilazione influisca su aspetti biologici rilevanti per la malattia. L’analisi funzionale di NEU2 supporta la ricerca meccanicistica sulle reti di processamento dei glicani e sul loro ruolo nell’omeostasi cellulare.

Neu2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NEU2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NEU2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NEU2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NEU2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.