NEIL1 Plasmide Double Nickase (h): sc-403778-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NEIL1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NEIL1 Double Nickase Plasmid (h) e il NEIL1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NEIL1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NEIL1 Antibody (D-1): sc-271164
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NEIL1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403778-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NEIL1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403778-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NEIL1 codifica endonucleasi VIII-like 1, una DNA glicosilasi/AP liasi che avvia la riparazione per escissione di basi (BER) riconoscendo ed eliminando basi ossidate come le formamidopirimidine e il glicole timinico. NEIL1 agisce nel genoma nucleare e sono stati riportati ruoli a livello delle forche di replicazione, contribuendo alla stabilità del genoma durante la fase S e coordinando la riparazione con la replicazione del DNA e con la dinamica della cromatina. Attraverso interazioni all’interno della BER e con la successiva sintesi di riparazione, NEIL1 aiuta a limitare la mutagenesi e lo stress replicativo che possono derivare da specie reattive dell’ossigeno e da danni endogeni al DNA. In ambito di ricerca, alterazioni dell’attività o dell’espressione di NEIL1 sono state associate a fenotipi rilevanti per la carcinogenesi, la neurodegenerazione e la disfunzione metabolica, a testimonianza dell’importanza della gestione del danno ossidativo al DNA nella biologia delle malattie umane.
NEIL1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NEIL1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NEIL1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NEIL1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NEIL1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.