NEIL1 Double Nickase Plasmid (h): sc-403778-NIC

NEIL1 kodiert Endonuklease‑VIII‑ähnliches Protein 1, eine DNA‑Glykosylase/AP‑Lyase, die die Basenexzisionsreparatur (BER) einleitet, indem sie oxidierte Basen wie Formamidopyrimidine und Thymin‑Glykol erkennt und entfernt. NEIL1 wirkt im nukleären Genom und übernimmt Berichten zufolge Funktionen an Replikationsgabeln, indem es während der S‑Phase die Genomstabilität unterstützt und Reparaturprozesse mit DNA‑Replikation und Chromatindynamik koordiniert. Über Interaktionen innerhalb der BER und der nachgeschalteten Reparatursynthese trägt NEIL1 dazu bei, Mutagenese und Replikationsstress zu begrenzen, die durch reaktive Sauerstoffspezies und endogene DNA‑Schäden entstehen können. Veränderte NEIL1‑Aktivität oder ‑Expression wurde in Forschungszusammenhängen mit Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Karzinogenese, Neurodegeneration und Stoffwechselstörungen relevant sind, was die Bedeutung der Verarbeitung oxidativer DNA‑Schäden in der Biologie menschlicher Erkrankungen unterstreicht.

NEIL1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NEIL1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NEIL1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NEIL1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NEIL1-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.