NARF Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407124

Panoramica

NARF (fattore di riconoscimento della prelamina A nucleare) codifica una proteina nucleare implicata nella maturazione e nel controllo qualità dei precursori della lamina A, sostenendo la corretta organizzazione dell’involucro nucleare e la stabilità del genoma. Interagendo con la prelamina A e con componenti correlati della lamina nucleare, NARF contribuisce a vie che collegano la proteostasi all’architettura nucleare, influenzando l’organizzazione della cromatina, le risposte al danno al DNA e la progressione del ciclo cellulare. L’alterazione della maturazione della lamina A e dell’omeostasi della lamina nucleare è associata a uno spettro di laminopatie e fenotipi progeroidi, rendendo NARF un nodo utile per studiare i meccanismi di stress nucleare. La funzione di NARF nell’uomo è inoltre rilevante per modelli che esaminano come una struttura nucleare alterata influenzi i programmi trascrizionali e i processi cellulari associati all’invecchiamento.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NARF (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NARF in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NARF insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NARF a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NARF.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NARF per lo studio della segnalazione di NARF, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NARF critici per la funzione di NARF
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NARF per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NARF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NARF CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NARF. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NARF Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NARF (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NARF per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NARF definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.