N6AMT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406341

Panoramica

EEF1AKMT1 codifica N6AMT2, una metiltransferasi della lisina che modifica fattori associati alla traduzione e contribuisce alla proteostasi regolando finemente la sintesi proteica e il controllo qualità co-traduzionale. N6AMT2 è stata collegata alla regolazione della funzione del ribosoma e, più in generale, del metabolismo dell’RNA, mettendola in relazione con programmi di crescita cellulare e con il controllo traduzionale adattativo in risposta allo stress. Un’alterata metilazione dei componenti della macchina di traduzione può rimodellare gli output di segnalazione a valle del sensing dei nutrienti e dello stress proteotossico, rendendo EEF1AKMT1 rilevante per studi su progressione del ciclo cellulare, apoptosi e adattamento metabolico. La disregolazione della traduzione e del controllo dipendente dalle metiltransferasi è osservata di frequente in contesti di ricerca oncologica e neurobiologica, a supporto dell’indagine su N6AMT2 in fenotipi associati a malattia senza implicare un’utilità clinica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO N6AMT2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene EEF1AKMT1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del EEF1AKMT1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto EEF1AKMT1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina N6AMT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di EEF1AKMT1 per lo studio della segnalazione di N6AMT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni EEF1AKMT1 critici per la funzione di N6AMT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di EEF1AKMT1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal N6AMT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal N6AMT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus EEF1AKMT1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal N6AMT2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR N6AMT2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia EEF1AKMT1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio EEF1AKMT1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.