Myosin XVIIIA Plasmide Double Nickase (m): sc-436163-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Myosin XVIIIa Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Myosin XVIIIa Double Nickase Plasmid (m) e il Myosin XVIIIa Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Myo18a. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Myosin XVIIIa Antibody (H-10): sc-365328
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Myosin XVIIIA Plasmide Double Nickase (m) | sc-436163-NIC | 20 µg | $410.00 |
Myo18a codifica la miosina XVIIIA, una miosina non convenzionale che collega la dinamica del citoscheletro di actina all’organizzazione intracellulare e alla segnalazione. Nelle cellule di topo, la miosina XVIIIA contribuisce a processi come l’adesione cellulare, la migrazione e il mantenimento dell’architettura cellulare coordinando complessi associati all’actina e interazioni di scaffolding. Un rimodellamento dell’actina deregolato e una segnalazione citoscheletrica alterata sono ampiamente pertinenti a fenotipi che coinvolgono cambiamenti di motilità, polarità e organizzazione tissutale, rendendo Myo18a un bersaglio utile per studi meccanicistici in questi pathway. Poiché il rimodellamento del citoscheletro si interfaccia con vie che influenzano la proliferazione e le risposte allo stress, perturbare Myo18a può aiutare a chiarire come le strutture dipendenti dall’actina plasmino il comportamento cellulare in modelli rilevanti per la malattia.
Myosin XVIIIa Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Myo18a nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Myo18a. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Myo18a. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Myo18a interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.