Myosin XVIIIA Double Nickase Plasmid (m): sc-436163-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Myosin XVIIIa Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Myosin XVIIIa Double-Nickase-Plasmid (m) und Myosin XVIIIa Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Myo18a abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Myosin XVIIIa: sc-365328
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Myosin XVIIIA Double Nickase Plasmid (m) | sc-436163-NIC | 20 µg | $410.00 |
Myo18a kodiert Myosin XVIIIA, ein unkonventionelles Myosin, das die Dynamik des Aktinzytoskeletts mit der intrazellulären Organisation und Signalübertragung verknüpft. In Mauszellen trägt Myosin XVIIIA zu Prozessen wie Zelladhäsion, Migration und der Aufrechterhaltung der Zellarchitektur bei, indem es aktinassoziierte Komplexe und Scaffold-Interaktionen koordiniert. Eine fehlregulierte Aktin-Remodellierung und Zytoskelett-Signalgebung ist für Phänotypen mit veränderter Motilität, Polarität und Gewebeorganisation breit relevant, wodurch Myo18a ein nützliches Ziel für mechanistische Studien in diesen Signalwegen darstellt. Da das Zytoskelett-Remodellierung mit Signalwegen verknüpft ist, die Proliferation und Stressantworten beeinflussen, kann die Perturbation von Myo18a dabei helfen, zu untersuchen, wie aktinabhängige Strukturen das Zellverhalten in krankheitsrelevanten Modellen prägen.
Myosin XVIIIa Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Myo18a-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Myo18a abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Myo18a-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Myo18a-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.