MYH9 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-421784-ACT

Myh9 codifica la catena pesante della miosina non muscolare IIA (MYH9), un motore fondamentale basato sull’actina che genera forza contrattile e sostiene la tensione corticale, la dinamica dell’adesione e la citochinesi. L’attività di MYH9 si integra con la segnalazione RhoA/ROCK, il rimodellamento delle fibre di stress dell’actina e il turnover delle adesioni focali per regolare polarità cellulare, migrazione e meccanotrasduzione. Nei tessuti murini, Myh9 contribuisce alla funzione delle cellule ematopoietiche e immunitarie, all’integrità epiteliale e alla morfogenesi dello sviluppo, rendendolo un nodo utile per studiare il controllo citoscheletrico dell’architettura tissutale. Una contrattilità dipendente da MYH9 deregolata è associata a difetti nella divisione cellulare e nella funzione di barriera ed è spesso analizzata in modelli di infiammazione, fibrosi e invasione associata al cancro.

MYH9 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Myh9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYH9 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Myh9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Myh9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYH9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Myh9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYH9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYH9 nelle cellule tumorali con espressione di Myh9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.