MYH10 Plasmide Double Nickase (m): sc-429543-NIC

Myh10 codifica la catena pesante della miosina non muscolare IIB (MYH10), un importante motore basato sull’actina che genera le forze contrattili necessarie per la citocinesi, la migrazione cellulare e il mantenimento dell’architettura tissutale. Le dinamiche actomiosiniche guidate da MYH10 regolano l’adesione e la polarità cellulare attraverso il turnover delle adesioni focali e il rimodellamento del citoscheletro dipendente da RhoA/ROCK, collegando la tensione meccanica a output di segnalazione che plasmano la morfogenesi. Nei sistemi murini, l’attività di MYH10 è strettamente legata ai programmi di sviluppo e all’organizzazione dei tessuti neurali e cardiovascolari, e la deregolazione della funzione della miosina II non muscolare è stata associata a difetti nella divisione cellulare, motilità alterata e interazioni aberranti con la matrice extracellulare, rilevanti per fenotipi associati a patologie. Queste proprietà rendono Myh10 un nodo utile per analizzare la meccanotrasduzione, l’organizzazione del citoscheletro e la regolazione dell’espressione genica dipendente dalle forze.

MYH10 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Myh10 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Myh10. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Myh10. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Myh10 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.