mPRδ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-413309-ACT

PAQR6 codifica il recettore di membrana del progesterone delta (mPRδ), un membro della famiglia dei recettori per i progestinici e AdipoQ, implicato nella segnalazione steroidea rapida e non genomica a livello delle membrane cellulari. mPRδ è associato alla modulazione di vie di secondi messaggeri, come la segnalazione mediata da proteine G, influenzando i flussi di calcio, la dinamica dell’AMPc e l’attività delle chinasi a valle, che possono determinare decisioni sullo stato cellulare, inclusi proliferazione, migrazione e risposte allo stress. Nei tessuti umani, l’espressione di PAQR6 è stata collegata a processi biologici sensibili alla regolazione endocrina e a reti di segnalazione del progesterone avviate dalla membrana che si intersecano con la regolazione metabolica e i processi infiammatori. La deregolazione della segnalazione PAQR6/mPRδ è stata studiata nel contesto della fisiopatologia associata agli ormoni e come possibile fattore contributivo in programmi cellulari rilevanti per la biologia del cancro e per la funzione dell’apparato riproduttivo.

mPRδ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PAQR6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

mPRδ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PAQR6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PAQR6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di mPRδ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PAQR6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da mPRδ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via mPRδ nelle cellule tumorali con espressione di PAQR6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.