mPRα Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402143

Panoramica

PAQR7 codifica il recettore di membrana per il progesterone alfa (mPRα), un recettore per i progestinici a sette domini transmembrana appartenente alla famiglia PAQR, che media una segnalazione rapida e non genomica del progesterone a livello della membrana plasmatica e delle membrane intracellulari. mPRα influenza processi cellulari che includono la segnalazione mediata da nucleotidi ciclici, cascate di chinasi, flussi di calcio e la regolazione di apoptosi e motilità cellulare, con effetti dipendenti dal contesto sui programmi trascrizionali attraverso vie a secondi messaggeri a valle. L’espressione di PAQR7 è stata riportata in tessuti riproduttivi e non riproduttivi, a supporto di ruoli nella risposta agli ormoni steroidei, nella regolazione neuroendocrina e nella segnalazione immunitaria ed epiteliale. La deregolazione della segnalazione di mPRα è stata studiata nella biologia ormone‑responsiva e in contesti rilevanti per la malattia, come i disturbi riproduttivi e modelli di tumore associato agli ormoni, in cui un’alterata risposta al progesterone può influenzare proliferazione, invasione e vie di adattamento allo stress.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO mPRα (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PAQR7 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PAQR7 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PAQR7 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina mPRα.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PAQR7 per lo studio della segnalazione di mPRα, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PAQR7 critici per la funzione di mPRα
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PAQR7 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal mPRα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal mPRα CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PAQR7. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal mPRα Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR mPRα (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PAQR7 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PAQR7 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.