MPP3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-420007

Panoramica

Mpp3 codifica la proteina di membrana palmitoilata 3 (MPP3), un membro della famiglia MAGUK di proteine scaffold che organizzano complessi multiproteici a livello della membrana plasmatica. MPP3 contribuisce alla polarità cellulare e all’architettura delle giunzioni collegando partner transmembrana a componenti del citoscheletro e della segnalazione attraverso i suoi domini PDZ, SH3 e simile alla guanilato chinasi. Nei tessuti murini, MPP3 è implicata nell’organizzazione epiteliale e in processi di traffico vescicolare/di membrana che influenzano la differenziazione e le funzioni di barriera. La deregolazione degli scaffold MAGUK è ampiamente associata ad alterazioni della segnalazione dipendente dall’adesione e alla disorganizzazione tissutale, rendendo Mpp3 un bersaglio utile per studiare meccanismi rilevanti per lo sviluppo e per cambiamenti dell’architettura cellulare associati a malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MPP3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mpp3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mpp3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mpp3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MPP3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mpp3 per lo studio della segnalazione di MPP3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mpp3 critici per la funzione di MPP3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mpp3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MPP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal MPP3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mpp3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MPP3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR MPP3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mpp3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mpp3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.