Mox1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400951-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Mox1 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- Mox1 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal Mox1 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal Mox1 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di NOX1. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Mox1 Antibody (C-10): sc-518023
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Mox1 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-400951-ACT | 20 µg | $397.00 |
La NOX1 (Mox1) umana codifica una subunità catalitica della NADPH ossidasi che trasferisce elettroni all’ossigeno molecolare per generare superossido e, a valle, specie reattive dell’ossigeno (ROS). I ROS derivati da NOX1 agiscono come secondi messaggeri che modulano reti di segnalazione sensibili al redox, tra cui MAPK/ERK, PI3K/AKT e NF-κB, influenzando proliferazione, differenziamento, migrazione ed espressione genica infiammatoria. La funzione di Mox1 è accoppiata a componenti organizzatrici/attivatrici di membrana e citosoliche e contribuisce alle risposte da stress ossidativo a livello della membrana plasmatica e delle endomembrane. Un’attività deregolata di NOX1 è stata associata al rimodellamento epiteliale e vascolare, alla patobiologia infiammatoria e a contesti di segnalazione legati al cancro, in cui un’omeostasi redox alterata può rimodellare i programmi trascrizionali.
Mox1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NOX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
Mox1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NOX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NOX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mox1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NOX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mox1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mox1 nelle cellule tumorali con espressione di NOX1 silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.