MOF Plasmide Double Nickase (h): sc-401891-NIC

KAT8 codifica per l’istone acetiltransferasi MOF (MYST1), un enzima “writer” centrale della marca H4K16ac che modula l’accessibilità della cromatina e l’output trascrizionale. MOF agisce all’interno di complessi multiproteici per coordinare programmi di espressione genica legati alla replicazione del DNA, alla segnalazione del danno al DNA e al mantenimento della stabilità genomica, incluso il crosstalk con le vie ATM/DDR. Attraverso il controllo dell’architettura dei nucleosomi e il reclutamento, dipendente dall’acetilazione, di regolatori della cromatina, MOF influenza la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e le risposte allo stress. La disregolazione di KAT8/MOF e l’alterazione dei pattern di acetilazione di H4K16 sono state associate a stati epigenetici aberranti osservati in molteplici contesti rilevanti per la malattia, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nella ricerca su cromatina e integrità del genoma.

MOF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KAT8 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KAT8. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KAT8. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KAT8 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.