Mlx Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403499-ACT

MLX codifica Mlx, un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix leucine zipper che forma eterodimeri obbligati con partner della famiglia Mondo, come MLXIP (MondoA) e MLXIPL (ChREBP), per collegare la disponibilità di nutrienti all’espressione genica. Questi complessi regolano programmi del metabolismo dei carboidrati e dei lipidi, inclusi la trascrizione responsiva al glucosio e le reti geniche glicolitiche/lipogeniche, mettendo in relazione il rilevamento dei metaboliti mitocondriali e citosolici con il controllo trascrizionale. Attraverso interazioni con il più ampio circuito trascrizionale MYC/MAX/MLX, Mlx contribuisce al coordinamento della crescita, dell’omeostasi energetica e delle risposte adattative allo stress. La disregolazione dei programmi trascrizionali associati a MLX è stata implicata in vie rilevanti per le malattie metaboliche e nel rimodellamento metabolico delle cellule tumorali, a supporto del suo impiego in studi meccanicistici sul controllo trascrizionale nel metabolismo e negli stati proliferativi.

Mlx Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MLX senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Mlx Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MLX nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MLX, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mlx. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MLX nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mlx nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mlx nelle cellule tumorali con espressione di MLX silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.